Autoevaluación TP Nº3Versión en línea Autoevaluación TP Nº 3 - Transformación de E. coli con el método de CaCl2 por Cecilia Di Capua 1 De las siguientes aseveraciones, es INCORRECTO afirmar que: Escoge una o varias respuestas a Solamente las bacterias transformadas con el plásmido sobrevivirán en las placas con ampicilina b Las bacterias transformadas expresarán la proteína GFP en las placas que contienen ampicilina c Un reducido porcentaje de las células incorporan el plásmido durante la transformación d Las células que no se transforman no pueden crecer en las placas con ampicilina 2 La selección de las células que se han transformado con el plásmido pET-MBP-GFP se realiza observando el crecimiento en placas que contienen a IPTG b Ampicilina c Cloruro de Calcio 3 Después de realizado el choque térmico, las células se incuban 5 minutos en hielo: a Para permitir la expresión de la GFP b Para permitir que las células se enfríen y no mueran por la alta temperatura c Para sellar los poros transientes de la membrana por los cuales ingresó el ADN 4 El choque térmico: a A- Se realiza a 42 ºC b B- Es el procedimiento utilizado para favorecer la captación de ADN c C- Se realiza para hacer crecer y proliferar las bacterias d D- A y B son correctas 5 El plásmido pET-MBP-GFP utilizado para transformar, lleva entre otros genes: a A- El gen gfp que codifica la proteína verde fluorescente b B- El gen bla que codifica una proteína que proporciona a la bacteria resistencia al antibiótico ampicilina c C- El gen que codifica para la proteína ORI d D- A y B son correctas 6 En ausencia de IPTG en la placa de cultivo las colonias bacterianas expuestas a la luz ultravioleta son de color: a Blancas b Verdes c Rojas d No crecen 7 Después de realizado el choque térmico e incubar 5 minutos en hielo, las células se incuban 30 minutos a 37 ºC con medio de cultivo para: a A- Permitir la expresión del marcador de selección b B- Permitir que las células se recuperen y no mueran por el shock c C- Permitir la expresión del gen GFP d D- A y B son correctas e E- B y C son correctas Explicación 1 Solo las células que hayan incorporado el plásmido pET-MBP18 o pET-MBP18-GFP van a crecer en medio con Amp 2 El marcador de selección en nuestro ensayo es el antibiótico Ampicilina 5 El Plásmido pET-MBP18GFP expresa la proteína fusionada GFP-MBP y la proteína que aporta resistencia a Amp codificada por el gen bla 6 Para que se exprese la GFP (que fluoresce al recibir luz UV) es necesario adicionar IPTG. En ausencia del inductor las colonias son blancas.
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