Cromatografía LiquidaVersión en línea Les proponemos que resuelvan el siguiente video interactivo para repasar algunos conceptos básicos de HPLC. Deben responder cada una de las preguntas sin saltarse ninguna para poder continuar y obtener un mínimo de 60 puntos. Una vez que elijan la respuesta, pulsen el botón responder. Verán la opción correcta e información adicional sobre esa respuesta. En algunas preguntas, puede haber más de una respuesta correcta. por Jesica Riquelme 1 ¿Cómo se compone la fase móvil en fase reversa? a Agua y un modificador orgánico b Agua y un modificador inorgánico c Agua y ácidos inorgánicos 2 La función principal de la bomba es: a Generar la elución de los componentes de la muestra b Mantener un caudal constante c Inyectar el eluyente a todo el sistema 3 ¿Cuál es la composición de la columna cromatográfica? a Acero- carbono- grupos hidrocarbonados b Acero- cuarzo- grupos hidrocarbonados c Acero- Sílice- grupos hidrocarbonados 4 ¿Cómo se produce la migración diferencial? a Por la afinidad de los componentes con la fase estacionaria. b Por la afinidad de los componentes con la fase móvil c Por la mayor afinidad de los componentes con alguna de las dos fases 5 ¿Cómo se diferencian los componentes que se observan en el cromatograma? a Haciendo pasar previamente un analito de máxima pureza y tomando una superficie de pico b Haciendo pasar previamente un analito de máxima pureza y tomando el tiempo de retención y una superficie de pico c Haciendo pasar previamente un analito de máxima pureza y tomando el tiempo de retención 6 Marque los componentes que se pueden diferenciar por HPLC Selecciona una o varias respuestas a Plaguicidas b Antibióticos c Proteínas d Hidrocarburos e Vitaminas f Metales pesados - Aditivos Explicación 1 Existen dos modos básicos de corridas: fase Fase estacionaria Fase móvil Fase normal Polar No polar Fase reversa No polar polar Dada la naturaleza hidrofílica de las muestras, la mayoría de las cromatografías se realizan en fase reversa, es decir, con fase estacionaria no polar y fase móvil polar. 2 Es necesario que las bombas puedan proveer al sistema de presión elevada (400 atm aprox.), deben estar libres de pulsaciones por lo que en algunos casos cuentan con un sistema de amortiguación. Tienen un amplio rango de flujos (0,1 a 10 ml/min). Previo a estas suele haber un mezclador de solventes que componen la fase móvil. 3 Tienen una determinada estructura donde la fase sólida se encuentra “empaquetada” dentro de una carcasa metálica, generalmente de acero inoxidable. La fase sólida se establece de acuerdo a las características de las sustancias que se quieren estudiar. 4 Los elementos que participan de esta reacción son: • La fase estacionaria • La fase móvil • La muestra La interacción entre ellas permite diferenciar los distintos productos, las especies más retenidas serán las que presenten mayor afinidad por la fase estacionaria que por la fase móvil. La muestra es inyectada en estado líquido y arrastrada por una corriente de eluyente (fase líquida). En consecuencia, la relación entre la retención de los componentes por la fase estacionaria y la solubilidad en el eluyente se denomina migración diferencial. 5 Tiempo de retención: está determinado por la estructura química de cada componente, por lo que es individual para cada uno. Altura/ Área: está relacionada con la concentración del componente. Ancho: está relacionado con la eficiencia del sistema, cuanto más angosta es la base del pico, mayor es la eficiencia del sistema, ya que permitirá identificar más cantidad de compuestos, sin que estos se superpongan. 6 La cromatografía líquida es muy utilizada en diversos campos, como la industria química, farmacéutica, de los alimentos y ciencias médicas, medioambientales, biociencia, entre otros, para diferenciar compuestos orgánicos, compuestos inorgánicos, materiales poliméricos, productos lábiles naturales, pesticidas.
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