PRÁCTICA Nº 02 MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

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Preuniversitario

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Magalys Monasteios

Venezuela

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PRÁCTICA Nº 02 MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA


PRÁCTICA Nº 02 MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y MICROSCOPÍA ELECTRÓNICAVersión en línea Preuniversitario por Magalys Monasteios 1 ¿Cuál es el principio fundamental de la espectrofotometría? a Medir la emisión de luz por fluorescencia. b Medir la absorción o transmisión de luz de un compuesto. c Observar la estructura atómica mediante electrones. d Detectar anticuerpos en muestras biológicas. 2 ¿Qué fenómeno ocurre cuando una molécula absorbe luz en espectrofotometría? a Los protones cambian de posición en la molécula. b La molécula emite luz fluorescente inmediatamente. c La molécula se descompone en átomos d Los electrones son promovidos a un nivel de energía mayor. 3 ¿Cuál es la longitud de onda típica para la luz visible según la tabla de regiones electromagnéticas? a 10-1 a 102 nm b 10-5 a 10-2 nm c 400 a 800 nm d 10-6 a 103 metros 4 ¿En qué año fue descubierta la microscopía de fluorescencia? a 1930 b 1925 c 1908 d 1945 5 ¿Qué son los fluorocromos en microscopía de fluorescencia? a Filtros que bloquean la luz de excitación. b Moléculas que absorben electrones en el microscopio electrónico. c Sustancias que emiten luz fluorescente a una longitud de onda específica. d Anticuerpos marcados con colorantes visibles. 6 ¿Cuál es la característica principal de la fluorescencia? a Emisión de luz ultravioleta tras absorción de luz visible. b Absorción de luz sin emisión posterior. c Emisión de luz de mayor longitud de onda tras absorción de energía. d Emisión de luz sin absorción previa. 7 ¿Qué función cumple el filtro dicromático en un microscopio de fluorescencia? a Emitir luz para excitar los fluorocromos. b Bloquear toda la luz emitida por la muestra c Reflejar la luz de excitación y dejar pasar la luz emitida por fluorescencia. d Aumentar la intensidad de la luz incidente. 8 ¿Qué es la inmunofluorescencia? a Conjugación de colorantes fluorescentes con anticuerpos para detectar antígenos específicos. b Uso de luz ultravioleta para observar tejidos sin marcadores c Técnica para medir la concentración de proteínas en solución d Método para teñir ácidos nucleicos con colorantes químicos. 9 ¿Cuál es la diferencia principal entre inmunofluorescencia directa e indirecta? a Directa usa anticuerpos secundarios; indirecta usa anticuerpos primarios. b Directa usa anticuerpo marcado; indirecta usa anticuerpo secundario marcado c Directa detecta ácidos nucleicos; indirecta detecta proteínas. d Directa se usa solo en tejidos; indirecta solo en células en suspensión. 10 ¿Cuál es una ventaja de la inmunofluorescencia? a Alta sensibilidad y rapidez en resultados. b No requiere personal especializado c Resultados 100% específicos. d Permite análisis in vivo fácilmente. 11 ¿Qué limita la resolución de los microscopios ópticos convencionales? a La longitud de onda de la luz visible (~0.5 µm). b La intensidad del haz de electrones. c La cantidad de fluorocromos usados. d La concentración de anticuerpos en la muestra 12 ¿Cuál es la longitud de onda asociada a electrones acelerados a 100 kV en un microscopio electrónico? a 0.037 Å b 0.5 µm c 400-800 nm d 0-5 a 10-2 nm 13 ¿Qué tipo de lente se utiliza para enfocar el haz de electrones en un microscopio electrónico? a Lentes magnéticas. b Lentes de vidrio convencionales c Lentes de fluorocromos. d Filtros ópticos. 14 ¿Por qué es necesario operar un microscopio electrónico en vacío? a Para mantener la muestra hidratada. b Para evitar que los electrones sean absorbidos o desviados por moléculas de aire c Para permitir la fluorescencia de los fluorocromos. d Para enfriar el filamento de tungsteno. 15 ¿Cuál es la función del cañón de electrones en un microscopio electrónico? a Emitir electrones que forman el haz para crear la imagen. b Detectar la luz fluorescente emitida por la muestra. c Aumentar la intensidad de la luz visible. d Bloquear electrones secundarios. 16 ¿Qué tipo de muestras requiere el Microscopio Electrónico de Transmisión (TEM)? a Muestras en suspensión líquida. b Muestras enteras sin preparación. c Sólo muestras fluorescentes d Cortes ultrafinos de aproximadamente 40 nm 17 ¿Cuál es el propósito de la fijación primaria en la preparación de muestras para TEM? a Eliminar el agua de la muestra b Preservar la estructura del tejido evitando procesos autolíticos. c Marcar la muestra con fluorocromos. d Aumentar la fluorescencia de la muestra. 18 ¿Qué técnica se utiliza para obtener imágenes tridimensionales de la superficie de muestras? a Microscopía Electrónica de Barrido (SEM). b Microscopía de Fluorescencia. c Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM). d Espectrofotometría UV-Vis. 19 ¿Cuál es la función del escintilador en un SEM? a Emitir electrones para el haz primario. b Convertir la energía cinética de electrones en luz visible. c Bloquear electrones secundarios. d Aumentar el voltaje de aceleración. 20 ¿Por qué se recubren las muestras con oro o paladio en SEM? a Para aumentar la resolución óptica. b Para aumentar la fluorescencia. c Para teñir proteínas específicas. d Para hacerlas eléctricamente conductivas y evitar acumulación de carga 21 ¿Cuál es una limitación común de la microscopía electrónica? a La baja resolución comparada con microscopía óptica b La necesidad de operar en vacío y la preparación compleja de muestras. c La imposibilidad de observar estructuras celulares. d La incapacidad para detectar proteínas específicas 22 ¿Qué representa una zona electron-densa en una micrografía de TEM? a Regiones con fluorescencia intensa. b Áreas sin presencia de metales pesados c Zonas con baja densidad molecular d Regiones con mayor concentración de metales pesados que dispersan electrones. 23 ¿Qué unidad es más adecuada para medir organelas celulares como mitocondrias? a Centímetros (cm). b Nanómetros (nm). c Angstroms (Å). d Micrómetros (μm). 24 ¿Cuál es la equivalencia correcta de 1 nanómetro en angstroms? a 1 nm = 100 Å b 1 nm = 0.1 Å c 1 nm = 10 Å d 1 nm = 0.001 Å 25 ¿Cuál es la función del filtro de emisión en un microscopio de fluorescencia? a Aumentar la intensidad de la luz incidente. b Emitir luz para excitar la muestra. c Bloquear toda la luz para evitar interferencias. d Seleccionar la luz emitida por el fluorocromo y bloquear la luz de excitación. Explicación 1 La espectrofotometría consiste en medir la absorción o transmisión de luz de un compuesto, lo que permite identificar o cuantificar sustancias. 2 La absorción de luz ocurre cuando los electrones de la molécula son promovidos a un nivel de energía mayor debido a la frecuencia de la luz. 3 La luz visible abarca longitudes de onda entre 400 y 800 nanómetros. 4 La microscopía de fluorescencia fue descubierta en 1908 por Köhler y Siedentopf 5 Los fluorocromos son sustancias que emiten un fotón de una longitud de onda específica tras ser excitados por luz. 6 La fluorescencia es la emisión de luz de una longitud de onda mayor inmediatamente después de la absorción de energía luminosa. 7 El filtro dicromático refleja la luz de excitación y permite que la luz fluorescente emitida por la muestra pase para formar la imagen. 8 La inmunofluorescencia utiliza anticuerpos marcados con fluorocromos para localizar proteínas o antígenos específicos en muestras biológicas. 9 La inmunofluorescencia directa marca directamente el anticuerpo primario, mientras que la indirecta utiliza un anticuerpo secundario marcado que reconoce al primario 10 La inmunofluorescencia es altamente sensible y permite obtener resultados rápidos, aunque requiere personal especializado y no es 100% específica 11 La resolución de los microscopios ópticos está limitada por la longitud de onda de la luz visible, que es demasiado grande para ver detalles atómicos. 12 Los electrones acelerados a 100 kV tienen una longitud de onda asociada de aproximadamente 0.037 Å, mucho menor que la luz visible. 13 Los microscopios electrónicos utilizan lentes magnéticas para enfocar y dirigir el haz de electrones, ya que las lentes ópticas convencionales no funcionan con electrones. 14 El vacío es necesario para evitar que los electrones sean absorbidos o desviados por las moléculas del aire, permitiendo un haz de electrones estable. 15 El cañón de electrones emite los electrones que forman el haz que interactúa con la muestra para formar la imagen. 16 El TEM requiere cortes ultrafinos para que el haz de electrones pueda atravesar la muestra y formar imágenes de alta resolución. 17 La fijación primaria con glutaraldehído preserva la estructura del tejido y evita la autólisis durante la preparación 18 El SEM permite obtener imágenes tridimensionales de la superficie de las muestras mediante el barrido con un haz de electrones. 19 El escintilador convierte la energía cinética de los electrones secundarios en luz visible para formar la imagen. 20 El recubrimiento con metales conductores permite que los electrones no se acumulen en la muestra, mejorando la calidad de la imagen. 21 La microscopía electrónica requiere vacío y preparación especializada, lo que limita su uso en muestras vivas o sin preparación. 22 Las zonas electron-densas son oscuras porque contienen metales pesados que dispersan los electrones, generando contraste. 23 Las organelas celulares se miden típicamente en micrómetros, ya que su tamaño es del orden de 1 a varios micrómetros. 24 Un nanómetro equivale a 10 angstroms, una unidad usada a nivel molecular 25 El filtro de emisión permite pasar sólo la luz fluorescente emitida por la muestra, bloqueando la luz de excitación para mejorar el contraste.

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por Magalys Monasteios

¿Cuál es el principio fundamental de la espectrofotometría?

¿Qué fenómeno ocurre cuando una molécula absorbe luz en espectrofotometría?

¿Cuál es la longitud de onda típica para la luz visible según la tabla de regiones electromagnéticas?

¿En qué año fue descubierta la microscopía de fluorescencia?

¿Qué son los fluorocromos en microscopía de fluorescencia?

¿Cuál es la característica principal de la fluorescencia?

¿Qué función cumple el filtro dicromático en un microscopio de fluorescencia?

¿Qué es la inmunofluorescencia?

¿Cuál es la diferencia principal entre inmunofluorescencia directa e indirecta?

¿Cuál es una ventaja de la inmunofluorescencia?

¿Qué limita la resolución de los microscopios ópticos convencionales?

¿Cuál es la longitud de onda asociada a electrones acelerados a 100 kV en un microscopio electrónico?

¿Qué tipo de lente se utiliza para enfocar el haz de electrones en un microscopio electrónico?

¿Por qué es necesario operar un microscopio electrónico en vacío?

¿Cuál es la función del cañón de electrones en un microscopio electrónico?

¿Qué tipo de muestras requiere el Microscopio Electrónico de Transmisión (TEM)?

¿Cuál es el propósito de la fijación primaria en la preparación de muestras para TEM?

¿Qué técnica se utiliza para obtener imágenes tridimensionales de la superficie de muestras?

¿Cuál es la función del escintilador en un SEM?

¿Por qué se recubren las muestras con oro o paladio en SEM?

¿Cuál es una limitación común de la microscopía electrónica?

¿Qué representa una zona electron-densa en una micrografía de TEM?

¿Qué unidad es más adecuada para medir organelas celulares como mitocondrias?

¿Cuál es la equivalencia correcta de 1 nanómetro en angstroms?

¿Cuál es la función del filtro de emisión en un microscopio de fluorescencia?