Genotecas y vectores

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Jugadas 2

Crear copia

Sobre esta actividad

plásmidos, bacteriófagos etc

Creada por

Regina Romero

México

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1	Regina Romero 6 de Agosto de 2025	% 95	06:57

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Genotecas y vectores


Genotecas y vectoresVersión en línea plásmidos, bacteriófagos etc por Regina Romero 1 Clonación molecular a Proceso que permite crear una copia idéntica de una molécula (generalmente DNA) b Proceso para crear copias genéticamente idénticas de una célula o tejido c Proceso que permite crear copias genéticamente idénticas de otro organismo original 2 Clonación celular a Proceso que permite crear una copia idéntica de una molécula (generalmente DNA) b Proceso para crear copias genéticamente idénticas de una célula o tejido c Proceso que permite crear copias genéticamente idénticas de otro organismo original 3 Clonación de individuos a Proceso que permite crear una copia idéntica de una molécula (generalmente DNA) b Proceso para crear copias genéticamente idénticas de una célula o tejido c Proceso que permite crear copias genéticamente idénticas de otro organismo original 4 Clonación molecular in vivo a utiliza los procesos metabólicos de una célula huésped para producir una copia idéntica de un fragmento (gen, operón) de DNA, el cual es introducido a la célula mediante un vector. b PCR c Western blot 5 Pasos clonación molecular a corte fragmento de interés->corte de vector (enzimas rest)->ligación de ambos fragmentos->Introducción en huésped->selección de células transformantes b corte fragmento de interés->corte de vector (enzimas rest)->ligación de ambos fragmentos->Introducción en huésped c corte de vector (enzimas rest)->ligación de ambos fragmentos->Introducción en huésped->selección de células transformantes 6 Tipos de vectores a Plásmidos (clonación y expresión), Bacteriófagos o fagos (clonación), Cósmidos, faguémidos (clonación y expresión), Cromosomas artificales (clonación y expresión) b Plásmidos (clonación y expresión), Bacteriófagos o fagos (clonación), Cósmidos, faguémidos (clonación y expresión) c Plásmidos (clonación y expresión), Bacteriófagos o fagos (clonación), Cromosomas artificales (clonación y expresión) 7 Plásmidos extracromosómicos de DNA circular Escoge una o varias respuestas a Poseen marcadores seleccionables (resistencia a antibióticos y/o genes complementarios). Sitio de clonación múltiple (MCS), que contienen traslapados o muy cercanos diferentes sitios de restricción. Aceptan insertos de 5-10kb b moléculas grandes circulares de DNA extracromosómico c pequeñas moléculas circulares de DNA de doble cadena, que se replican en las bacterias con independencia del cromosoma bacteriano (sitio ORI), que les da especificidad de huésped. d Vectores lanzadera (shuttle vectors) capaces de replicarse en dos tipos diferentes de huésped. Número variable de copias por célula (alto y bajo número de copias). e Ninguna de las anteriores 8 pBR322 a Dos genes de selección (resistencia a antibióticos ampicilina y tetraciclina). Algunos sitios de restricción en donde se pueden insertar fragmentos de DNA exógenos (3 en Amp, 5 en Tet) inactivación por inserción. b Un gen de selección (resistencia a antibióticos tetraciclina). Algunos sitios de restricción en donde se pueden insertar fragmentos de DNA exógenos (3 en Amp, 5 en Tet) inactivación por inserción. c No tiene gen de selección (resistencia a antibióticos ampicilina y tetraciclina) 9 pGEM serie de plásmidos comerciales Escoge una o varias respuestas a Promotores T7 y SP6 que flanquean a la región de clonación múltiple, marcadores de resistencia (AMPR) y gén lacZ b Sitio ori E.coli, vector de clonación y expresión c Vector de expresión d Sitio ara E.coli 10 Bacteriófagos Escoge una o varias respuestas a virus que infectan a otros virus b Fago alfa c virus que infectan específicamente a bacterias. d Fago λ. Fago M13 (DNAss) 11 Bacteriófago λ Escoge una o varias respuestas a El tercio central de su genoma , la región entre J y N que consta de aproximadamente15 kb puede ser cortada con enzimas de restricción y substituida por un fragmento de DNA foráneo b molécula resultante de DNA recombinante puede ser empaquetada en las cabezas del fago in vitro. c Clonación de Fragmentos de 12 Kb hasta 25 Kb el doble de capacidad que los vectores plasmídicos pequeños. Se usan para construir genotecas de clonación. d molécula resultante de DNA recombinanteno puede ser empaquetada en las cabezas del fago in vitro. e Ninguna de las anteriores 12 Faguémidos y cósmidos Escoge una o varias respuestas a Cósmidos: unión de partes del fago λ y un plásmido b Cósmidos: unión del fago filamentoso M13 y un plásmido (pBR323) c Faguémidos: unión del fago filamentoso M13 y un plásmido (pBR323) d Faguémidos: unión de partes del fago λ y un plásmido 13 Cósmidos Escoge una o varias respuestas a contiene sitios de inicio de la replicación del plásmido y los fragmentos cos del fago, poseen los marcadores seleccionables y el MCS del plásmido b Del plásmido: el ori de replicación y un gen de resistencia a antibiótico, puede contener más segmentos como gen lacZ, que permite la selección blanco/azul de colonias. c Del plásmido: fragmentos complementarios del genoma del fago y los extremos COS, que se emplean para la recircularización y empaquetamiento del DNA. d Permiten clonar fragmentos de hasta 45Kb, e Del fago: fragmentos complementarios del genoma del fago y los extremos COS, que se emplean para la recircularización y empaquetamiento del DNA. f Del fago: el ori de replicación y un gen de resistencia a antibiótico, puede contener más segmentos como gen lacZ, que permite la selección blanco/azul de colonias. 14 Cromosomas artificiales (adicionales al huésped) Escoge una o varias respuestas a BAC cromosomas artificiales de bacterias, aceptan fragmentos entre 30 y 150Kb b BAC cromosomas artificiales de levaduras, aceptan fragmentos entre 200 y 1000Kb c YAC cromosomas artificiales de levaduras, aceptan fragmentos entre 200 y 1000Kb d YAC cromosomas artificiales de bacterias, aceptan fragmentos entre 30 y 150Kb 15 BACs Escoge una o varias respuestas a Cromosomas artificiales de levaduras, basados en el plásmido F. Marcador seleccionable (cat) confiere resistencia a cloranfenicol b Cromosomas artificiales de bacterias, basados en el plásmido F. Marcador seleccionable (cat) confiere resistencia a cloranfenicol c Genes necesarios para la replicación (oriT y repE). Genes sopA y sopB que mantienen bajo el numero de copias d Genes necesarios para la replicación (oriS y repE). Genes sopA y sopB que mantienen bajo el numero de copias e Ninguna de las anteriores 16 YACs Escoge una o varias respuestas a Sitio múltiple de clonación. Origen de replicación del DNA (ARS). Centrómero de levadura b Sitio único de clonación. Origen de replicación del DNA (ARS). Centrómero de levadura c Dos telómeros en los extremos del cromosoma (TEL). Marcador de selección (URA3) d Tres telómeros en los extremos del cromosoma (TEL). Marcador de selección (URA3) e Sitios de restricción únicos para insertar DNA. Centrómero (CEN) para su segregación durante la mitosis. f Sitios de restricción únicos para insertar DNA. Centrómero (CEN) para su agregación durante la mitosis. 17 Tipos de genotecas o bibliotecas genómicas según características y posibilidades de uso Escoge una o varias respuestas a Bibliotecas de clonación (vectores de clonación). Permiten la transcripción y traducción in vivo del DNA clonado b Bibliotecas de clonación (vectores de clonación). Permiten conservar un fragmento o colección de fragmentos de DNA c Bibliotecas de expresión (vectores de expresión). Permiten la transcripción y traducción in vivo del DNA clonado d Bibliotecas de expresión (vectores de expresión). Permiten conservar un fragmento o colección de fragmentos de DNA 18 Tipos de genotecas o bibliotecas genómicas consdierando cobertura de DNA clonado Escoge una o varias respuestas a Genotecas parciales, minigenotecas o bancos de genes. Aislamiento de fragmentos, genes u operones de una cepa de interés. Conservación del DNA de una muestra, especie o individuo b Ninguna de las anteriores c Bibliotecas genómicas. Contienen, en forma de fragmentos clonados de DNA, el genoma completo de un individuo o de una especie. d Todas las anteriores e Bibliotecas de DNAc. Colección de los fragmentos de RNAm que se han retrotranscrito a DNAc. 19 Aplicaciones genotecas de cromosomas artificiales Escoge una o varias respuestas a Todas las anteriores b Construcción y expresión en E. coli de genotecas de cromosomas artificiales bacterianos con fragmentos gDNA (5−120 Kpb) c Ninguna de las anteriores d Identificación de metabolitos o enzimas de interés, BAC permiten crear genotecas más completas.

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por Regina Romero

Clonación molecular

Clonación celular

Clonación de individuos

Clonación molecular in vivo

Pasos clonación molecular

Tipos de vectores

Plásmidos extracromosómicos de DNA circular

pBR322

pGEM serie de plásmidos comerciales

Bacteriófagos

Bacteriófago λ

Faguémidos y cósmidos

Cósmidos

Cromosomas artificiales (adicionales al huésped)

BACs

YACs

Tipos de genotecas o bibliotecas genómicas según características y posibilidades de uso

Tipos de genotecas o bibliotecas genómicas consdierando cobertura de DNA clonado

Aplicaciones genotecas de cromosomas artificiales